CTLL-2細胞|CTLL-2細胞株 培養說明

CTLL-2細胞|CTLL-2細胞株 培養說明

一、細胞培養條件

產品名稱：CTLL-2細胞

中文名稱：小鼠T淋巴細胞

生產特性：懸浮生長

培養條件：RPMI1640+100U/ml（重組白介素-2）+10% FBS

傳代方法：1:2

傳代情況：2-3天換液/傳代

凍存條件：90% FBS+10%DMSO

支原體檢測：陰性

產品供應商：上海慧穎生物科技有限公司

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二、細胞收到后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。

三、細胞培養步驟

1. 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養隔夜（或將細胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養基，培養隔夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上培養液終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按6-8ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養液的新皿中或者瓶中。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

注意：

我細胞庫認為購買細胞的客戶有培養細胞的經驗，客戶收到細胞后，嚴格按照本細胞培養條件更換*培養基。（細胞庫推薦使用的培養基，我庫使用的培養基為Gibco,血清SERANA或Gemini，雙抗Gibco，胰酶Gibco）

如果因為客戶缺少基本的細胞培養知識或培養條件而導致細胞各類問題，我庫概不負責。對于因缺少細胞培養知識和時間，建議客戶可我細胞庫代為培養細胞和后續相關實驗。