EBTr （NBL-4）細胞 細胞株復蘇失敗原因分析

EBTr (NBL-4)細胞 細胞株復蘇失敗原因分析

產品名稱：EBTr (NBL-4)細胞

中文名稱：牛胚氣管細胞

種屬：牛

來源：

培養(yǎng)條件：

生長狀態(tài)：

2017年新學期，迎著朝陽，放飛夢想，久別重逢，相聚一堂，百尺竿頭，更進一步，學無止境，自立自強，為國爭光，慧穎細胞庫為答謝各位莘莘學子的厚愛，在新學期開學之際，將慧穎細胞庫1223株細胞特惠出售，更多活動詳情，請致電市場部！

EBTr (NBL-4)細胞 細胞株復蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細胞復蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細胞狀態(tài)不好，形態(tài)不佳，透光度亦不好，如果老師認為復蘇過程沒問題，那就核實下是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%，看看能否幫助貼壁，當然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細胞沒問題。

有的老師認為首先應該懷疑凍存，實際上復蘇出問題的可能非常小，因為操作簡單，而且死板。

1、確認下凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，但我們因為這個問題就兩種肺癌細胞和一種肝癌細胞專門做過試驗，這個是絕大部分人細胞復不活的一個原因。太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序，不可逆轉的死亡。

2、老師的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質量非常重要，否則也會死亡。

3、老師的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過7%，大于5%，太多也不好。

4、老師在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。

5、老師的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。

6、如果老師的細胞污染，你是否能很快看到。從這個角度講建議去除離心這步。

7、老師的細胞在凍存前是否過密。

還有，我們是不贊成孵箱污染這個概念的，所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話，這個細菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌，問題在操作。我們的細胞房不換拖鞋，非常臟，別人的細胞都污染，很多細胞都污染到絕種，但我們的只污染一次（兩年內只有兩瓶），那次是因為當初有某高校組織學生參觀我們細胞庫給動過了，我們每次細胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染，我們會認為老師的復蘇培養(yǎng)細胞經驗還需要進一步熟練和積累經驗。

每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題，這個很重要，不能靠猜。

EBTr (NBL-4)細胞 細胞株復蘇失敗原因分析

CHL 倉鼠肺細胞 中國倉鼠 肺；自發(fā)永生；雌性 DMEM 貼壁

R 1610 倉鼠肺細胞 中國倉鼠

V79 倉鼠肺細胞 中國倉鼠 肺；自發(fā)永生；雄性 DMEM 貼壁

CHO/dhFr- 倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷 中國倉鼠

CHO-K1 倉鼠卵巢細胞亞株 中國倉鼠 卵巢；自發(fā)永生；雌性 F12K 貼壁

CTLA4 Ig-24 中國倉鼠卵巢細胞 中國倉鼠

Lec1 倉鼠卵巢細胞 中國倉鼠

HMy2.CIR 人B淋巴母細胞 人 B細胞；EBV轉染；女性 IMDM 懸浮

hFOB 1.19 人SV40轉染成骨細胞 人 成骨細胞；SV40轉化；條件永生；女性 DMEM/F12 貼壁

HBL-100 人整合SV40基因的乳腺上皮細胞 人 乳腺；上皮細胞；SV40轉化；男性 1640 貼壁

EA.hy926 人臍靜脈細胞融合細胞 人 臍靜脈；內皮細胞；A549融合；女性 DMEM 貼壁

WISH 人羊膜細胞 人 宮頸癌；女性 EMEM 貼壁

RWPE-1 人正常前列腺上皮細胞 人 前列腺上皮；HPV18轉化；男性 F12K/1640 貼壁

SV-HUC-1 人輸尿管上皮永生化細胞 人 輸尿管上皮；SV40轉化；男性 F12K 貼壁

WPMY-1 人正常前列腺基質永生化細胞 人

Pt K1 (NBL-3) 袋鼠腎細胞 長鼻袋鼠

Ana-1 小鼠巨噬細胞 小鼠 巨噬細胞；J2逆轉錄病毒轉染；C57BL/6 1640 懸浮

MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 小鼠 前骨細胞；自發(fā)永生；C57BL/6 EMEM 貼壁

A9 小鼠皮下結締組織細胞 小鼠

LWnt-3A 小鼠皮下結締組織細胞 小鼠

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞 小鼠 胚胎；成纖維；自發(fā)永生；雄性；Swiss albino DMEM 貼壁

3T6-Swiss albino 小鼠胚胎成纖維細胞 小鼠 胚胎；成纖維；自發(fā)永生；雄性；Swiss albino DMEM 貼壁

BALB/3T3 clone A31 小鼠胚胎成纖維細胞 小鼠 胚胎；成纖維；自發(fā)永生；雄性；BALB/c DMEM 貼壁

C2C12 小鼠成肌細胞 小鼠 成肌細胞；自發(fā)永生，雌性；C3H DMEM 貼壁

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L] 小鼠成纖維細胞 小鼠 成纖維細胞；自發(fā)永生；雄性；C3H/An

TM3 小鼠睪丸間質細胞 小鼠 睪丸間質；自發(fā)永生；雄性 1640 貼壁

B95-8 絨猴EBV轉化的白細胞 絨猴 白細胞；EBV轉化 1640 懸浮

Mv.1.Lu(NBL-7) 貂肺上皮細胞 貂 肺；自發(fā)永生 DMEM/EMEM 貼壁

MCF7 [MCF-7] 人乳腺癌細胞 人 浸潤性導管癌；胸腔積液轉移；女性 EMEM

MDA-MB-231 人乳腺癌細胞 人 乳腺腺癌；胸腔積液轉移；女性 L15

MDA-MB-415 人乳腺腺癌細胞 人 乳腺腺癌；胸腔積液轉移；女性 L15

MDA-MB-435S 人乳腺導管癌 人

C-33 A 人子宮頸癌 人

HeLa 人宮頸癌細胞 人 宮頸癌；女性 DMEM

HeLa 229 人宮頸癌細胞 人 宮頸癌；女性 EMEM

ME-180 人子宮頸表皮癌細胞 人 宮頸鱗狀細胞癌；女性 EMEM

MS751 人子宮頸表皮癌細胞 人

SiHa 人子宮頸鱗癌細胞 人 宮頸鱗狀細胞癌；女性 EMEM

JAR 人胎盤絨毛癌細胞 人

JEG-3 人絨毛膜癌細胞 人 妊娠性絨毛膜癌；腦轉移；女性 EMEM

RD 人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞 人 胚胎性橫紋肌肉瘤；女性 DMEM

A-375 人惡性黑色素瘤細胞 人 無黑色素黑色素瘤；女性 DMEM

為了應付季節(jié)變化CV-1細胞運輸、培養(yǎng)帶來的真菌等污染問題，公司特做以下建議：

1）細胞的運輸、轉移過程中，請勿打開自封袋；拿放細胞時請持瓶體，切勿在非無菌環(huán)球中碰觸、擰動瓶口封口膜位置

2）進入生物安全柜前，打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶，噴上酒精放進操作臺（不建議使用酒精棉球擦拭），撕開封口膜后，用酒精燈外焰對瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養(yǎng)瓶，擰開瓶蓋（如是貼壁細胞，請用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基，切勿讓瓶口處的液體回流進瓶內）

4）更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基，嚴格按照無菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)