RAW264.7細(xì)胞形態(tài)，RAW264.7細(xì)胞株操作說明

RAW264.7細(xì)胞形態(tài)，RAW264.7細(xì)胞株操作說明RAW264.7細(xì)胞形態(tài)

操作說明：

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況。

（一）  如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

運(yùn)輸保存：

采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí)，若干冰已經(jīng)*融化，請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請(qǐng)按條件貯存細(xì)

胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

注意事項(xiàng)

1 ）操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺(tái)后手要用 75% 酒精或 0.2% 新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。

2 ）點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過營養(yǎng)液的用具

不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。

3 ）操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。

4 ）不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺(tái)面上用品要布局合理。

5 ）瓶子開口后要盡量保持 45℃ 斜位。

6 ）吸溶液的吸管等不能混用 。

慧穎生物常賣細(xì)胞：

 SV40-MES-13    小鼠腎小球系膜細(xì)胞  DMEM/F12+10%FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣

LLC 小鼠lewis肺癌細(xì)胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xì)胞樣

GL261   小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞  DMEM/F12+10%FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣

Neuro-2a    小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞    MEM+10% FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣

L929    小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆 MEM+10% FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣

MC38    小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞  DMEM+10% FBS    懸浮+貼壁   上皮細(xì)胞樣

B16-F10 小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xì)胞樣

MEL 小鼠紅白血病細(xì)胞    RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細(xì)胞樣

NCTC 1469   小鼠正常肝細(xì)胞  DMEM+10% HS 馬血清  貼壁    淋巴母細(xì)胞

STC-1   小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞  DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xì)胞樣

Hepa 1-6    小鼠肝癌細(xì)胞    DMEM+10% FBS    貼壁    上皮細(xì)胞樣

Ana-1   小鼠巨噬細(xì)胞    RPMI-1640+10% FBS   懸浮+貼壁   淋巴母細(xì)胞

Sp2/0-Ag14  小鼠骨髓瘤細(xì)胞  DMEM+10%FBS 懸浮+貼壁   淋巴母細(xì)胞

MPC-5   小鼠足細(xì)胞  DMEM+10%FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣

HL-1    小鼠心肌細(xì)胞    DMEM+10%FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣

CT26    小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞  RPMI-1640+10% FBS   貼壁    上皮細(xì)胞樣

BAF3、BA/F3 小鼠原B細(xì)胞株  RPMI-1640+10% FBS+10ng/ml IL-3 懸浮    淋巴母細(xì)胞

BALB/3T3 clone A31  小鼠胚胎成纖維細(xì)胞  DMEM+10%FBS 貼壁    成纖維細(xì)胞

C17.2   小鼠神經(jīng)干細(xì)胞  DMEM+10%FBS 貼壁    成纖維細(xì)胞

C3H/10T1/2, Clone 8 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞  MEM+10%FBS  貼壁    成纖維細(xì)胞

RENCA   小鼠腎癌細(xì)胞    1640+10%FBS+0.1mM 非必需氨基酸+1mM 丙酮酸鈉+2mM L-谷氨酰胺+1%P/S    貼壁    上皮細(xì)胞樣

IMCD3   小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細(xì)胞    DMEM/F12+10%FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣

MB49    小鼠膀胱癌細(xì)胞  DMEM+10%FBS 貼壁    上皮細(xì)胞樣