NK-92MI 細胞傳代方法

NK-92MI 細胞傳代方法 慧穎生物墻裂推薦

產品名稱：NK-92MI 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

貨號：H103

種屬：人

來源：ATCC/中科院/協和醫院等地引進

生長狀態：懸浮 淋巴母細胞養 成團聚集

培養條件：培養基：a-MEM（無核酸，有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉） +43.2μg/mL Inositol+8.82μg/mL Folic acid+0.1mM 2-巰&基乙醇+12.5%FBS+12.5%HS+1% P/S（推薦HAKATA優等胎牛血清，貨號:HN-FBS-50; 馬血清，貨號：HM-FBS-50）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,5% CO2

傳代方法：

用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒，將其豎直置于培養箱中進行2-4小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，小心吸取上層培養基，留2-4ml培養基以將大部分細胞留在培養瓶底部，加入新鮮培養基。吸取出的舊培養基1000r/min 離心5min后，去除上清，根據細胞數量決定是合到一起還是另行取新培養瓶培養。根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液或傳代，每2至3天加入新鮮培養基（根據細胞密度）,盡量少用離心的方式換液;

通過添加新鮮培養基來維持培養。或者可以通過離心去除舊培養基，再加入新培養基并以2-3×10⁵個活細胞/mL的密度再懸浮進行培養。建議將細胞密度維持在2×10⁵個至1×10⁶個細胞/mL之間。當細胞團過大時可輕輕吹打成小細胞團，不要吹打過度。

常見問題及解決方案：

1.培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加 10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間長不宜超過 72 小時）

3.細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

保存方法：

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預熱后使用。)

保存條件：液氮存儲

僅供研究之用

來源：慧穎生物，盜圖必究