ELISA法檢測HBV與金標(biāo)快速法兩者相比較

　　探討hbv采用金標(biāo)快速法與elisa法檢測的結(jié)果對比分析。方法 本次研究選擇我院體檢某校新生為對象,分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa）和金標(biāo)快速法對hbv進(jìn)行檢測,就臨床結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 elisa法與金標(biāo)快速法平行檢測hbv結(jié)果,經(jīng)rpha法初篩,200份為hbsag陽性血清,對其分別使用elisa法與金標(biāo)快速測試法對乙肝五項進(jìn)行平行檢測,結(jié)果無明顯差異（p>0.05）。

    hbv五項指標(biāo)2種方法檢測結(jié)果的總符合率分別為98.5%、99.5%、99%、96%、96.5%。以elisa為常規(guī)方法對金標(biāo)快速測試法進(jìn)行驗證,則金標(biāo)法分別為99.5%、100%、98.5%、94.5%、95%敏感性。特異性分別為84.5%、99.5%、96.5%、96%、96%。結(jié)論 金標(biāo)快速法更方便、簡單、準(zhǔn)確、快速,在對乙肝病毒五項指標(biāo)快速測定中較為適用,無需溫育、洗滌、終止等相對復(fù)雜的步驟,對儀器設(shè)備要求不高,可通過肉眼在15min后讀出結(jié)果,可將此方法用于健康查體、大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查中,特別是在各種內(nèi)窺鏡檢查的術(shù)前,和健康人群的篩查,值得廣泛推廣應(yīng)用。病毒性肝炎在臨床具有較強(qiáng)感染力、發(fā)病率較高,對人類健康造成嚴(yán)重威脅的傳染性疾病,其中危害zui大的是乙型肝炎（hbv）,hbv表面攜帶者至2002年止,據(jù)who初步估計有4億以上,其中約有1.3億發(fā)生在我國,且母嬰傳播所造成的感染約占30%～50%[1]。

    在對乙肝預(yù)后進(jìn)行預(yù)測、流行病學(xué)調(diào)查、獻(xiàn)血人員篩查、公共環(huán)境衛(wèi)生、乙型肝炎免疫水平等實驗室檢測中,乙型肝炎表面抗原（hbaag）、e抗原（hbeag）、抗心抗體（抗-hbc）、表面抗體（抗-hbs）、e抗體（抗-hbe）等實用項目檢測的方法較為重要。本次研究選擇我院體檢某校新生為對象,分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa）和金標(biāo)快速法對hbv進(jìn)行檢測,就臨床結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。

    1 資料與方法
    1.1 一般資料 本次研究對象4600例,行3～5ml靜脈血采集,將血清分離,初篩應(yīng)用反向被動血球凝集試驗（rpha）的方法,將hbsag陽性的血清對乙肝hbaag、抗-hbs、抗-hbc、hbeag、抗-hbe分別用elisa和金標(biāo)法平行進(jìn)行檢測,隨機(jī)分為elisa法組200例,金標(biāo)快速法組200例,2組對象在年齡、性別、病性、病程及hbeag檢測方面比較無統(tǒng)計學(xué)差異（p >0.05）,具有可比性。
    1.2 方法
    1.2.1 金標(biāo)快速檢測法 血清（血漿）與乙肝抗體（抗原）內(nèi)的相應(yīng)抗原（抗體）特異性結(jié)合以金、銀、硒等為標(biāo)志物,依據(jù)雙抗原（抗體）夾心原理,對該抗體（抗原）在經(jīng)組織化學(xué)的呈色反應(yīng)之后進(jìn)行定性檢測。先從冰箱中在試驗前取出測試條,常溫1～2h放置后使用,依次在試驗前將hbv五項指標(biāo)測試條的一端在盛有血清標(biāo)本的試管中插入約5s,后取出在白紙上放置,對弱陽性結(jié)果等待10～15min行判斷,對強(qiáng)陽性結(jié)果在2min內(nèi)即可觀察,zui遲不宜超過20min。結(jié)果判定:若有一條紅色線先后在測試條中段出現(xiàn),則為陽性,若無紅色線出現(xiàn)為測試條失效或試驗失敗。

    1.2.2 elisa法 hbsag目前常用的免疫測定方法為elisa試驗,應(yīng)用多克隆或單克隆抗體,針對hbaag的α決定簇,為雙抗體夾心模式,可行0.5ng/ml以下的測定。乙型肝炎在早期診斷指標(biāo)為血清中檢出hbsag,除急性期外,在發(fā)生hbv感染后,大部分人無臨床表現(xiàn)。但hbsag可在血中檢出,這類人群為hbsag攜帶者。 hbv感染的標(biāo)志為血清hbaag。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用spss13.0統(tǒng)計學(xué)軟件,計數(shù)資料行c2檢驗,p 0.05）,見表1。hbv五項指標(biāo)2種方法檢測結(jié)果的總符合率分別為98.5%、99.5%、99%、96%、96.5%。以elisa為常規(guī)方法對金標(biāo)快速測試法進(jìn)行驗證,則金標(biāo)法分別為99.5%、100%、98.5%、94.5%、95%敏感性。特異性分別為84.5%、99.5%、96.5%、96%、96%。

    2 討論
    慢性乙型肝炎在我國為高度流行區(qū),在我國人口中,hbsag陽性者占8.83%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出世界水平,hbv變異株近年來有研究出現(xiàn)使患者h(yuǎn)bv感染復(fù)制狀況更難診斷,常有漏診發(fā)生[2]。熒光定量pcr為一項實時檢測技術(shù),操作通過*閉管式進(jìn)行,使擴(kuò)增產(chǎn)物的污染大大減少,并使檢測的特異性提高,擴(kuò)增產(chǎn)物或通過電腦自動讀數(shù)來行定量,使檢測的靈敏度提高,避免了普通pcr檢測方法的缺點[3]。

    因fprobe的加入,fq-pcr更加提高了產(chǎn)物熒光定量檢測的特異性,并可得出定量結(jié)果,減少了實驗步驟,并使操作進(jìn)一步簡化,使自動化的程度增加。 膠體金標(biāo)記抗體檢測細(xì)菌表面抗原是1997年有學(xué)者曾報道的方法,在多種病原微生物中成為重要的檢測手須,本次研究采用金標(biāo)快速法對hbv五項進(jìn)行檢查,并和elisa行平行試驗,總符合較高,且2種方法檢測結(jié)果無明顯差異性,與elisa法比較,金標(biāo)快速法更方便、簡單、準(zhǔn)確、快速,在對乙肝病毒五項指標(biāo)快速測定中較為適用,無需溫育、洗滌、終止等相對復(fù)雜的步驟,對儀器設(shè)備要求不高,可通過肉眼在15min后讀出結(jié)果,可將此方法用于健康查體、大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查中,特別是在各種內(nèi)窺鏡檢查的術(shù)前和健康人群的篩查,故在hbv五項指標(biāo)快速測定中,金標(biāo)快速法為較理想的方法,快速、使用簡單、準(zhǔn)確性高,值得廣泛推廣應(yīng)用。