ELISA基本概念原理和操作

　　ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，ELISA試劑盒每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，豬ELISA試劑盒從而保證試驗結果的特異性與穩定性。禽ELISA試劑盒在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法ELISA試劑盒價格以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。白介素ELISA試劑盒比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。    

　　ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。上海ELISA試劑盒此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。

　　方法一：用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法：

　　1.　包被：用0.05M PH9，碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml，在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

　　3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

　　5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，上海ELISA試劑盒則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

　　方法二：用于檢測未知抗體的間接法：

　　用包被緩沖液ELISA試劑盒將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時，豬ELISA試劑盒洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，ELISA試劑盒價格加入新鮮稀釋的酶標禽ELISA試劑盒第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30～60分鐘，洗滌，白介素ELISA試劑盒zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。