人橋連整合因子1（BIN1）ELISA試劑盒說明書

中文名稱：人橋連整合因子1（BIN1）ELISA試劑盒

英文名稱：Human Bridging Integrator 1 （BIN1）ELISA Kit

別名：人橋連整合因子1（BIN1）酶免試劑盒；人橋連整合因子1（BIN1）ELISA 檢測試劑盒

規格：96T

關于 人橋連整合因子1（BIN1）ELISA試劑盒說明書  詳情如下：

試劑盒技術參數：

試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R 值為0.92 以上。

            2.批內與批間應分別小于9%和15%

檢測范圍：5pg/ml -180pg/ml

保存條件：2-8°C

有效期：6個月

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上

清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心

20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次

離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程

中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞

濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備

用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器

將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待

檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上

進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

檢測目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中橋連整合因子1（BIN1）含量。

實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人橋連整合因子1（BIN1）水平。用純化的人橋連整合因子1（BIN1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入橋連整合因子1（BIN1），再與HRP 標記的橋連整合因子1（BIN1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的橋連整合因子1（BIN1）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人橋連整合因子1（BIN1）濃度。

試劑盒組成：

試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存

說明書1 份1 份

封板膜2 片（48） 2 片（96）

密封袋1 個1 個

酶標包被板1×48 1×96 2-8℃保存

標準品：270pg/ml 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存

標準品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存

酶標試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

顯色劑A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

顯色劑B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

終止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存

濃縮洗滌液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶2-8℃保存。

操作步驟：

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180pg/ml， 120pg/ml，60pg/ml，30pg/ml， 15pg/ml）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。

注意事項：

1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5.   封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物請避光保存。

7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9． 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

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