MOTN-1細胞操作步驟

MOTN-1細胞，人T細胞大顆粒淋巴細胞白血病細胞

種屬：人

組織來源: 外周血（Peripheral blood）

疾病: T細胞大顆粒淋巴細胞白血病（T-cell large granular lymphocyte leukemia）

年齡: 65歲（65 years）

性別: 女（Female）

細胞類型: 淋巴細胞樣（Lymphocyte-like）

生長特性: 懸浮生長（Suspension）

收到培養瓶中細胞操作步驟：

對于懸浮培養的細胞，寄送前，我們會將培養基充滿整個培養瓶，以減少產品運輸過程中細胞所受震蕩。

1. 收到細胞產品后，請注意觀察是否有污染。將培養瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。

2. 將培養瓶豎直放置于37℃培養箱中直至溫度平衡，隨后，在生物安全柜中，轉移培養瓶中的細胞至離心管中，離心200×g / 5 -10 min，去除上清后，用5mL培養基吹散細胞。

3. 對上述細胞懸液進行細胞計數及活力檢測，調整細胞密度至2- 3*10的5次方，并轉移至新的培養瓶中。

4. 將培養瓶豎直放置于含有5% CO 的37℃恒溫培養箱中培養。如果細胞達到傳代培養的密度，則進行傳代培養。

收到凍存細胞操作步驟：

注意：為保存細胞的高存活率，請收到產品后，立即解凍培養。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉移到含有5mL培養基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

4. 用培養基重新懸浮細胞并轉移到新的培養瓶中。為保證細胞復蘇的存活率，請將培養基在37℃水浴預熱后使用。

5、將細胞置于含有5% CO 的37℃恒溫培養箱中培養。

懸浮細胞傳代培養：

懸浮細胞的傳代可通過補加或置換新鮮培養基的方式來完成，

具體做法如下：

1. 取出少量細胞懸液進行細胞計數及活力檢測，當細胞密度達到 ×106 cells/mL 時，進行細胞傳代培養。

2. 取足量細胞加入到盛有新鮮培養基的培養瓶中，將細胞密度維 持在 ×105 cells/mL。

3. 將培養瓶豎直放置于含有5% CO 的37℃恒溫培養箱中培養。如果細胞達到傳代培養的密度，則進行傳代培養。

培養基換液: 每隔 2 至 3 天。

培養基配制：

該細胞系培養所用基本培養基為 RPMI1640,配置培養基時需加入10%FBS，100 U/mL IL-2,1%Anti-Anti。