小鼠I型膠原C端肽（CTX-I）Elisa試劑盒說明書

小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒說明書

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠CTX-I抗體包被于酶標板上，實驗時標本或標準品中的CTX-I會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠CTX-I抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗小鼠CTX-I抗體與結合在包被抗體上的小鼠CTX-I結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現(xiàn)藍色，加終止液后變黃。用酶標儀在450nm波長處測OD值，CTX-I濃度與OD₄₅₀值之間呈正比，通過繪制標準曲線求出標本中CTX-I的濃度。

標本收集:

1. 血清：全血標本于室溫放置2小時或4℃置夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。

2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA.Na2，標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。

3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。

5. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

6. 標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。

7. 標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃冰箱內，避免反復凍融，1-6月內檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。

8. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù))。

小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒說明書

注意事項：

1. 保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會出現(xiàn)錯誤的結果。

1. 酶標板：剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。
2. 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。每次的加樣時間控制在10分鐘內。推薦設置復孔。
3. 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時必須給酶標板覆膜；洗板后應盡快進行下步操作，避免酶標板處于干燥狀態(tài)；嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水。在讀數(shù)前要注意清除底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標儀讀數(shù)。
5. 試劑配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate體積較小，運輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用前1000轉/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標準品、生物素化抗體工作液、酶結合物工作液請根據(jù)所需用量配制，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請配制標準品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab時，一次不要小于10μL），以避免由于不準確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素化抗體工作液、酶結合物工作液。若需要分次使用標準品應按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存。避免反復凍融。
6. 顯色時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免顏色過深影響酶標儀讀數(shù)。
7. 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
8. 混勻：充分輕微混勻對反應結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕敲擊酶標板框混勻。
9. 安全：試驗中請穿著實驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標本時，請按國家生物試驗室安全防護條例執(zhí)行。
10. 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應終止液除外）
11. 試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴禁混用，否則將影響試驗結果！

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