淺談RAW264.7細胞單核巨噬細胞培養

RAW264.7細胞單核巨噬細胞 是一種常規細胞，在細胞庫中常見，是一株普通細胞，但卻是一種比較難養的細胞，下面就RAW264.7細胞單核巨噬細胞，以下簡稱“RAW264.7細胞"培養經驗和大家一起淺談一下：

首先選擇RAW264.7細胞的培養基，培養條件：1640培養液+Serana胎牛血清FBS 10%（素爾生物*代理）。PH：2gNaHCO3每1L 1640培養液。

在我公司培養的過程中，從來沒有用過胰酶消化傳代。一直是直接用彎嘴滴管吹打的。只要按照順序一片片地吹打，很容易就能夠把該細胞吹打下來。吹打一遍之后，置鏡下觀察哪里還有未吹下的細胞，再著重吹打。吹打過程中，注意用力，要比常規稍加力度以能夠吹下細胞。當然，用胰酶消化也是可以的，但是細胞的生長狀態就是沒有不用直接吹打下來的好。

對于RAW264.7細胞，他的生長時喜歡扎堆的。正常的生長狀態應該是一小片一小片地生長。片片之間不連接，等到長的更多更密的時候就會連成大片，并且會疊加成層。所以，要很好地控制好細胞的生長速度，不要等到疊加成層的時候再傳代。一般，在細胞小片小片地鋪滿瓶底而未連成大片的時候就該傳代了。并且一旦有片細胞疊加成層就要進行傳代。否則該處細胞必老化。影響整體生長狀態！

該細胞的生長速度比較快，常規留種下，一般3-4天傳代。有時生長旺盛的時候甚至2天就需要傳代，所以在你傳新瓶的時候，盡量少留種，我們在平時維持的時候，一般都是只在新瓶里用滴管口蘸一下而已。能夠維持4-5天再傳代。如果是一次性大塑料瓶，則可以維持7天左右。過節假日時可以用此方法維持。

RAW264.7細胞傳代后貼壁時間比較短，半小時就能貼很多，剛貼壁時細胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察明亮如小珍珠狀一個個地散落于瓶底面。生長一段時間后，部分細胞會變為類似四角形或多邊形，伸出偽足之類的吧。這個時候其實就是提示你注意傳代了，這部分細胞如再不傳代，很容易就老化掉。

RAW264.7細胞生長速度非常得快，貼壁速度很快，對生長空間的要求比較敏感。所以傳代的時候以及培養的時候都要注意不要太多的細胞在培養瓶里，這樣細胞狀態會比較好。很多反而不利于該細胞生長。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結果是不好的。所以在養細胞的時候應該把我好該細胞喜歡的生長空間密度。

對于細胞生長狀態不好的時候，可以采取“二傳"的方法：

對于有些人總是會遇到養的細胞形態怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態不好，（或者細胞形態不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：

首先，倒掉舊的培養基，加入3ml新的培養基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養基，進行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞我們只吹打，不消化的）

其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養瓶內，培養瓶事先加入培養基，放入培養箱內培養，按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養基，加入3ml新培養基再輕輕洗一次。然后加入*培養基培養。后續觀察細胞生長情況以及形態。我稱之為“二傳"。

如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞形態。其中要注意，結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。

RAW264.7細胞本身就會呈不規則狀的多邊形，所以當細胞呈現這種形狀的時候，不必大驚小怪，在培養瓶里多數細胞呈現出此種形狀之時，其實就是提示你他的生長狀態即將趨于不好了，有些老化了，該傳代或者優化篩選了。