淺談RAW264.7細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞培養(yǎng)

RAW264.7細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞 是一種常規(guī)細(xì)胞，在細(xì)胞庫(kù)中常見(jiàn)，是一株普通細(xì)胞，但卻是一種比較難養(yǎng)的細(xì)胞，下面就RAW264.7細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞，以下簡(jiǎn)稱“RAW264.7細(xì)胞"培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)和大家一起淺談一下：

首先選擇RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件：1640培養(yǎng)液+Serana胎牛血清FBS 10%（素爾生物*代理）。PH：2gNaHCO3每1L 1640培養(yǎng)液。

在我公司培養(yǎng)的過(guò)程中，從來(lái)沒(méi)有用過(guò)胰酶消化傳代。一直是直接用彎嘴滴管吹打的。只要按照順序一片片地吹打，很容易就能夠把該細(xì)胞吹打下來(lái)。吹打一遍之后，置鏡下觀察哪里還有未吹下的細(xì)胞，再著重吹打。吹打過(guò)程中，注意用力，要比常規(guī)稍加力度以能夠吹下細(xì)胞。當(dāng)然，用胰酶消化也是可以的，但是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)就是沒(méi)有不用直接吹打下來(lái)的好。

對(duì)于RAW264.7細(xì)胞，他的生長(zhǎng)時(shí)喜歡扎堆的。正常的生長(zhǎng)狀態(tài)應(yīng)該是一小片一小片地生長(zhǎng)。片片之間不連接，等到長(zhǎng)的更多更密的時(shí)候就會(huì)連成大片，并且會(huì)疊加成層。所以，要很好地控制好細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，不要等到疊加成層的時(shí)候再傳代。一般，在細(xì)胞小片小片地鋪滿瓶底而未連成大片的時(shí)候就該傳代了。并且一旦有片細(xì)胞疊加成層就要進(jìn)行傳代。否則該處細(xì)胞必老化。影響整體生長(zhǎng)狀態(tài)！

該細(xì)胞的生長(zhǎng)速度比較快，常規(guī)留種下，一般3-4天傳代。有時(shí)生長(zhǎng)旺盛的時(shí)候甚至2天就需要傳代，所以在你傳新瓶的時(shí)候，盡量少留種，我們?cè)谄綍r(shí)維持的時(shí)候，一般都是只在新瓶里用滴管口蘸一下而已。能夠維持4-5天再傳代。如果是一次性大塑料瓶，則可以維持7天左右。過(guò)節(jié)假日時(shí)可以用此方法維持。

RAW264.7細(xì)胞傳代后貼壁時(shí)間比較短，半小時(shí)就能貼很多，剛貼壁時(shí)細(xì)胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察明亮如小珍珠狀一個(gè)個(gè)地散落于瓶底面。生長(zhǎng)一段時(shí)間后，部分細(xì)胞會(huì)變?yōu)轭愃扑慕切位蚨噙呅危斐鰝巫阒惖陌伞＿@個(gè)時(shí)候其實(shí)就是提示你注意傳代了，這部分細(xì)胞如再不傳代，很容易就老化掉。

RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)速度非常得快，貼壁速度很快，對(duì)生長(zhǎng)空間的要求比較敏感。所以傳代的時(shí)候以及培養(yǎng)的時(shí)候都要注意不要太多的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶里，這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。很多反而不利于該細(xì)胞生長(zhǎng)。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng)，而堆與堆之間是有空間的。如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿片的時(shí)候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了，老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該把我好該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度。

對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好的時(shí)候，可以采取“二傳"的方法：

對(duì)于有些人總是會(huì)遇到養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好的問(wèn)題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，（或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作：

首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無(wú)血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過(guò)一遍，然后吸走。這時(shí)侯再開(kāi)始正式的消化、吹打。（巨噬細(xì)胞我們只吹打，不消化的）

其次，把吹打下來(lái)的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳"。

如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長(zhǎng)得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。

RAW264.7細(xì)胞本身就會(huì)呈不規(guī)則狀的多邊形，所以當(dāng)細(xì)胞呈現(xiàn)這種形狀的時(shí)候，不必大驚小怪，在培養(yǎng)瓶里多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)出此種形狀之時(shí)，其實(shí)就是提示你他的生長(zhǎng)狀態(tài)即將趨于不好了，有些老化了，該傳代或者優(yōu)化篩選了。