HL-7702【HL-7702】細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

HL-7702【HL-7702】細(xì)胞常見問題 1：

液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

答：要冷藏！！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基冷凍后再化凍時(shí)，其溶液的pH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響,對細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月~一年。

HL-7702【HL-7702】細(xì)胞常見問題 2：

培養(yǎng)液pH對細(xì)胞生長的影響有哪些？

答：由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生不良的影響。各種細(xì)胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對pH變動耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。

但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。因此，我們在配制培養(yǎng)用液時(shí)，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

HL-7702【HL-7702】細(xì)胞常見問題3：

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎？

答：不見得！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱膒H、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強(qiáng)。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。

培養(yǎng)細(xì)胞每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。

細(xì)胞中心通常使用的消化液濃度為：

（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

（3）0.25% 胰蛋白酶

    溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。

多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液。

HL-7702【HL-7702】細(xì)胞常見問題4：

培養(yǎng)細(xì)胞狀態(tài)欠佳原因有哪些：

答：1、  培養(yǎng)基的新鮮程度：一般加入血清后的*培養(yǎng)基，2周內(nèi)用完。否則血清有效成分失活，影響細(xì)胞培養(yǎng)。

         建議：*培養(yǎng)基一次不要配太多，200ml以下。或根據(jù)用量決定。

 2、  細(xì)胞外源微生物的污染：細(xì)胞不宜長期體外培養(yǎng)，因?yàn)橥庠次⑸镂廴镜膸茁蚀蟠筇岣摺Ｒ装l(fā)現(xiàn)和難發(fā)現(xiàn)的。影響細(xì)胞狀態(tài)。

        建議：實(shí)驗(yàn)前凍存一批細(xì)胞，隔幾個(gè)月重新復(fù)蘇。即保證實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞代數(shù)一致，又將外源污染的后果降到zui低。

3、  排除其他原因：如更換培養(yǎng)條件（血清、培養(yǎng)基等）；使用器皿的潔凈程度；

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