大腸桿菌常用培養(yǎng)方法

大腸桿菌常用培養(yǎng)方法

使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
組成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl 5g,瓊脂 15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。
具體配置步驟：
1.稱(chēng)藥品 按實(shí)際用量計(jì)算后,按配方稱(chēng)取各種藥品放入大燒杯中.牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱(chēng)量,用熱水溶解后倒入大燒杯;也可放在稱(chēng)量紙上稱(chēng)量,隨后放入熱水中,牛肉膏使與稱(chēng)量紙分離,立即取出紙片.蛋白胨極易吸潮,故稱(chēng)量時(shí)要迅速.
2.加熱溶解 在燒杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉網(wǎng)上,小火加熱,并用玻棒攪拌,待藥品*溶解后再補(bǔ)充水分至所需量.若配制固體培養(yǎng)基,則將稱(chēng)好的瓊脂放入己溶解的藥品中,再加熱融化,此過(guò)程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底或溢出,zui后補(bǔ)足所失的水分.
3. 調(diào)pH 檢測(cè)培養(yǎng)基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時(shí)用pH試紙檢測(cè),直至達(dá)到所需pH范圍.若偏堿,則用lmol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié).pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前.應(yīng)注意pH值不要調(diào)過(guò)頭,以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度.
4.過(guò)濾 液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾,固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過(guò)濾,以利培養(yǎng)的觀察.但是供一般使用的培養(yǎng)基,這步可省略.
5.分裝 按實(shí)驗(yàn)要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi).分裝時(shí)可用漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上而造成污染.
分裝量:固體培養(yǎng)基約為試管高度的l/5,滅菌后制成斜面.分裝入三角瓶?jī)?nèi)以不超過(guò)其容積的一半為宜.半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝.
6.加棉塞 試管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脫脂棉）制作的棉塞.棉塞的形狀,大小和松緊度要合適,四周緊貼管壁,不留縫隙,才能起到防止雜菌侵入和有利通氣的作用.要使棉塞總長(zhǎng)約3/5塞入試管口或瓶口內(nèi),以防棉塞脫落.有些微生物需要更好的通氣,則可用8層紗布制成通氣塞.有時(shí)也可用試管帽或塑料塞代替棉塞.
7.包扎 加塞后,將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報(bào)紙,以防滅菌時(shí)冷凝水沾濕棉塞.若培養(yǎng)基分裝于試管中,則應(yīng)以5支或7支在一起,再于棉塞外包一層牛皮紙,用繩扎好.然后用記號(hào)筆注明,培養(yǎng)基名稱(chēng),組別,日期.
8.滅菌 將上述培養(yǎng)基于121.3℃濕熱滅菌20min.如因特殊情況不能及時(shí)滅菌,則應(yīng)故人冰箱內(nèi)暫存.
9.無(wú)菌檢查 將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃溫箱中培養(yǎng)24～48h,無(wú)菌生長(zhǎng)即可使用,或貯存于冰箱或清潔的櫥內(nèi),備用.

大腸桿菌的培養(yǎng)：
37攝氏度，恒溫培養(yǎng)48到72小時(shí)，因?yàn)榻臃N時(shí)和具體培養(yǎng)條件的不同，其生長(zhǎng)一般都在2天外才能長(zhǎng)出明顯的菌落。
菌落特征：乳白色，圓形，菌落邊緣整齊，表面光滑，表面和背面顏色一致。