大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA試劑盒

大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA試劑盒檢測原理：

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 HCY 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 HCY與單抗結合，加入生物素化的抗大鼠HCY，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，zui后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，HCY濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中HCY濃度。

大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA試劑盒操作流程：

1. 標準品的稀釋與加樣：標準品按照說明書稀釋好五個梯度，各個梯度每孔加樣量都為50μl，
2. 加樣：分別設空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液洗滌：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用；小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
6. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
7. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應
10. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

11.計算:

以標準物的濃度為綜坐標，OD值為橫坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項：

 1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。

 2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

 3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

 4. 本試劑盒宜置4^oC冰箱保存。

 5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！